分子定向進(jìn)化是利用現代分子生物學(xué)方法,人為模擬自然進(jìn)化機制,人工合成大量的突變同源基因文庫。然后,采用靈敏的定向篩選策略,創(chuàng )造出自然界不存在的或某些特性有顯著(zhù)改變的突變蛋白質(zhì)或其他生物分子。分子定向進(jìn)化已廣泛應用于蛋白質(zhì)的分子改造,抗體親和力成熟等方向,被認為是改良全新蛋白質(zhì)特性或優(yōu)化序列的高效方法。

精準突變文庫可以改變蛋白質(zhì)的特定位點(diǎn)或者DNA的調控區域,可以用來(lái)研究結構和功能之間的關(guān)系。根據不同設計目的,體外合成的精準突變文庫可以更精確、更隨意的控制所研究序列的多樣性。而且,合成的精準突變文庫可以顯著(zhù)提高獲得核酸或蛋白質(zhì)突變體的效率,有助于下游研究。泓迅科技可以設計或合成客戶(hù)所需的各種DNA精準突變文庫。

服務(wù)優(yōu)勢

  1. 序列控制精準
  2. 合成效率高
  3. 高性?xún)r(jià)比方案
  4. 高度定制化

文庫類(lèi)型

1、簡(jiǎn)并突變文庫

遺傳密碼子具有簡(jiǎn)并性,即一個(gè)氨基酸可由一個(gè)以上的三聯(lián)體密碼子編碼的現象。利用遺傳密碼的簡(jiǎn)并性可以在保持氨基酸序列多樣性的同時(shí),減少密碼子的冗余,提高篩選效率。

服務(wù)優(yōu)勢

?    高效率產(chǎn)品交付
?    合成技術(shù)穩定,質(zhì)控嚴格
?    20種氨基酸100%覆蓋,充分保證文庫多樣性

案例一

NNK文庫是一種經(jīng)典的簡(jiǎn)并突變文庫,所使用的 NNK簡(jiǎn)并引物包含了32(4x4x2)種密碼子組合(N= A/C/G/T, K= G/T),覆蓋了所有20種氨基酸,可以將任意位點(diǎn)的氨基酸進(jìn)行飽和突變。


圖1. NNK文庫,其中5個(gè)NNK位點(diǎn)所包含的每種密碼子的比例

2、Trimer文庫

使用單一核苷合成的引物,在突變位點(diǎn)處會(huì )不可避免的產(chǎn)生冗余突變和終止密碼子。將三個(gè)核苷按固定順序連接起來(lái)所形成的三聯(lián)核苷(Trimer Phosphoramidites)可以對應單一的氨基酸,不僅可以在被突變序列的任意位置引入全部20個(gè)氨基酸的混合物,而且可以避免密碼子偏移、移碼突變和控制終止密碼子的摻入等問(wèn)題。

以Trimer混合物作為元件設計的精準文庫,即Trimer文庫,能夠保證突變位點(diǎn)的氨基酸按照設計的比例構成,滿(mǎn)足特定位點(diǎn)氨基酸的多樣性和密碼子的偏好性。因此,Trimer文庫常被用于解決復雜型文庫的設計和合成問(wèn)題,可進(jìn)一步提高文庫篩選的精確度和準確性。

服務(wù)優(yōu)勢

?    高性?xún)r(jià)比解決方案
?    降低后續篩選難度
?    合成效率高,序列控制精準

案例一

Trimer文庫可用于進(jìn)行位點(diǎn)飽和突變,將20種氨基酸等比例分布,進(jìn)一步減少文庫中密碼子冗余,去除終止密碼子。

Trimer文庫
圖2. Trimer文庫,也是每種氨基酸等比例分布的飽和突變文庫,
其中5個(gè)位點(diǎn)所包含的每種密碼子的比例

案例二

Trimer文庫還可自定義每個(gè)位點(diǎn)由比例不等的氨基酸組成,在中4個(gè)Trimer位點(diǎn)中,如X1 Trimer位點(diǎn)為A (80%) :G(3%) :R (3%) :S (3%):T (8%) :V (3%)

自定義氨基酸的種類(lèi)和比例 每種氨基酸的實(shí)際比例與理論比例之間的比值
圖3.自定義氨基酸的種類(lèi)和比例 圖4. 每種氨基酸的實(shí)際比例與理論比例之間的比值

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