免疫組庫(Immune Repertoire,IR)是指在任何指定時(shí)間,某個(gè)個(gè)體的循環(huán)系統中所有功能多樣性B細胞和T細胞的總和。

人體淋巴細胞主要包括T細胞、B細胞。B細胞約占外周淋巴細胞總數的20%,其主要功能是產(chǎn)生抗體介導體液免疫應答。B細胞抗原受體((B cell receptor, BCR)是B細胞識別抗原的一種膜表面免疫球蛋白(SmIg),具有抗原結合特異性。BCR由兩條重鏈和兩條輕鏈連接而成,其中重鏈分為可變區(V區)、恒定區(C區)、跨膜區及胞質(zhì)區;輕鏈則只有V區和C區。V區由VH和VL兩個(gè)結構域組成,它們各由三個(gè)互補決定區(CDR1、CDR2和CDR3)組成,CDR的氨基酸組成和排列順序呈現高度多樣性,在同一個(gè)體內,可高達109~1012,構成容量巨大的BCR庫,賦予個(gè)體識別各種抗原、產(chǎn)生特異性抗體的巨大潛能,這三個(gè)CDR均參與對抗原的識別,共同決定BCR的抗原特異性。

T細胞主要功能是介導細胞免疫。T細胞抗原受體(T cell receptor,TCR)是T細胞特異性識別和結合抗原肽-MHC分子的分子結構,大多數TCR由α和β肽鏈組成,少數T細胞的TCR由γ和δ肽鏈組成。每條肽鏈又可分為可變區(V區),恒定區(C區),跨膜區和胞質(zhì)區等幾部分,而α和β兩條肽鏈的V區(Vα、Vβ)又各有三個(gè)高變區CDR1、CDR2、CDR3,其中以CDR3變異最大,直接決定了TCR的抗原結合特異性。TCR的CDR3由V、D、J三個(gè)基因編碼,在淋巴細胞的成熟過(guò)程中,通過(guò)V、D、J基因的重排形成了各種重組序列片段,再加上DNA堿基的SNP、Indel突變形成了T細胞的多樣性。

免疫組庫測序(Immuno-Seq)是以 T/B 淋巴細胞為研究目標,以5’RACE技術(shù)擴增決定B細胞受體(BCR)或T細胞受體(TCR)多樣性的互補決定區(CDR區),結合高通量測序技術(shù),全面評估免疫系統的多樣性。Immuno-Seq技術(shù)可以觀(guān)察和分析T細胞和B細胞,具有較高的測序深度和特異性。在疾病監控,抗體生產(chǎn),疫苗研究,健康體檢等領(lǐng)域有廣泛的應用。

抗體組庫服務(wù)優(yōu)勢:

  1. 采用RACE技術(shù)和專(zhuān)門(mén)優(yōu)化的PCR擴增體系與程序,降低免疫組庫中基因擴增偏向性
  2. 多樣化的NGS分析平臺
  3. 極高的成功率與快速交付速度
  4. 完備的生物信息學(xué)分析,深度挖掘高價(jià)值信息

抗體組庫應用方向:

  1. 免疫組庫或抗體組庫多樣性分析表征健康狀況
  2. 示蹤抗原特異性抗體發(fā)育過(guò)程,開(kāi)發(fā)人源化抗體
  3. 評價(jià)疫苗保護性能

抗體組庫服務(wù)內容:
抗體組庫/免疫組庫測序
 

客戶(hù)提供 交付內容 發(fā)貨周期 價(jià)格
1-2 ml血液或提取的高質(zhì)量RNA 1. NGS測序數據

2. 生物信息學(xué)數據分析結果

6-8周 咨詢(xún)

 
泓迅經(jīng)典案例:

免疫組庫測序及生信分析

  1. 文庫構建
  2. 泓迅科技對RNA提取后經(jīng)5’RACE反轉錄并擴增建庫。

  3. 文庫質(zhì)檢
  4. 文庫構建完成后,我們使用 Qubit2.0 Fluorometer 進(jìn)行初步定量,稀釋文庫后使用 Agilent 2100 bioanalyzer 對文庫進(jìn)行insert size檢測。符合預期后,利用Q-PCR對文庫有效濃度進(jìn)行準確定量(文庫有效濃度高于2nM),以確保文庫質(zhì)量。

  5. 文庫測序
  6. 檢測合格后將不同文庫按照有效濃度及目標下機數據量的需求,混樣后進(jìn)行 Illumina Miseq/HiSeq 測序。在flow cell 中加入四種熒光標記的 dNTP、DNA 聚合酶以及接頭引物進(jìn)行擴增;在每一個(gè)測序簇延伸互補鏈時(shí),捕獲新加入每一個(gè)dNTP后就釋放出來(lái)的對應熒光信號,并通過(guò)專(zhuān)業(yè)軟件將光信號轉化為測序峰,從而獲得待測片段的序列信息。

  7. 數據分析
  8. 測序數據的質(zhì)量評估

    ? Per base sequence quality ? Per Sequence Quality Scores
    抗體測序生信分析服務(wù)1 抗體測序生信分析服務(wù)2
    ? Per Base Sequence Content ? Per Base GC Content
    抗體測序生信分析服務(wù)3 抗體測序生信分析服務(wù)4
    ? Per Sequence GC Content ? Per Base N Content
    抗體測序生信分析服務(wù)5 抗體測序生信分析服務(wù)6
    ? Sequence Length Distributionreads ? Duplicate Sequences
    抗體測序生信分析服務(wù)7 抗體測序生信分析服務(wù)8

 
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